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组织培养的条件和培养基制备注意事项

文章作者:腾昊科技 发布时间:2021-09-07 14:57:13 浏览次数:156

  植物组织培养的条件

  1、植物组织培养的整个操作和培养过程都要求在严格无菌条件下进行,无菌是组织培养成功的首要条件。操作过程在接种室内超净工作台上进行;外植体材料要进行表面消毒;配制的培养基要进行高压灭菌消毒。

  2、温度处理操作和培养过程都是在恒温条件下进行,一般在23—27℃之间,热带植物可偏高些,脱毒植物需要高温处理。

  3、光照处理植物的器官必须有光,某些植物器官的生成是在无光条件下,但它的生长和发育必须有光。茎尖的生长及试管苗的继代增殖以3000-5000lux光照强度适宜;生根试管苗以3000lux适宜。光质对愈伤组织诱导、增殖、器官的分化有不同的影响。光周期诱导一般是16h,黑暗是12h,对光周期敏感植物要掌握光照时间,否则影响植物的分化。

  4、培养基的酸碱度因植物的种类不同而有区别,大多数植物要求在5.8之间,喜酸性培养的植物要求的酸碱度较严格。


  培养基的成分

  1、用于植物组织培养的培养基迄今不下几十种。归纳起来,任何一种培养基均有以下几部分组成:无机盐(大量元素、微量元素),有机化合物(蔗糖、维生素类、氨基酸、核酸及其他水解化合物),铁盐螯合剂,植物激素。

  植物激素的纯度对于组织培养的成功至关重要。接种的外植体,其分化速度(长芽)和分化方向(长根),均取决于所加激素的种类、数量及比例。简言之,主要是生长素和细胞分裂素的加入量以及两者的比例。一般生长素类包括吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸;细胞分裂素类包括激动素、苄基氨基嘌呤、二甲基丙烯氨基嘌呤。

  培养基中的糖类主要是蔗糖,少数情况下使用葡萄糖。大量生产可使用蔗糖。糖在培养基中的作用是提供碳源,同时用于维持渗透平衡,琼脂是固体培养基中的成分,作为固化剂支持。培养物在培养基的成本消耗中,琼脂占有相当大的比例,培养基中琼脂的加入量一般为4-7g。

  2、在组织培养生产中,培养基的制备对母液的需求量相当大,需一批一批地连续配制。为简化配制过程,提高工作效率,一般将各种所需药品先配制成高浓度溶液,贮备起来。到配制培养基时,按要求的浓度取一定量稀释即可;我们称这些高浓度的溶液为贮备液,习惯上称母液。

  制备母液时,先将所有药品分成几组,每组药品制成一种母液。分组的原则是同组药品混合溶解时不会发生质的变化,也不产生沉淀。一般将药品分成5组:大量元素、微量元素、铁盐、有机化合物类和植物激素。其中植物激素母液有若干种,每种激素都先制成1mg/ml的溶液。


  母液制备注意事项

  1、药品称量要尽可能准确。大量元素用百分之一(千分之一)天平称取,而微量元素、有机物类、植物激素等,则必须使用万分之一的天平。

  2、母液配制完毕注入试剂瓶后,一定要标明母液的名称、序号、浓度和配制日期等。

  3、配制好的母液应放置在冷藏箱内保存,尤其是有机物和激素类。


  培养基的配制

  1、将用于配制培养基的容器洗净,加入培养基总量四分之三的蒸馏水,放入所需的琼脂和糖,然后加热溶解。在加热过程中应不断地搅拌,以避免琼脂粘锅或溢出。

  2、待琼脂和糖完全溶解后,按顺序加入各贮备液以及所需的植物激素。

  3、用蒸馏水定容补充由于加热蒸发所损失的体积。

  4、用蒸馏水调整pH。

  5、通过漏斗或下口杯将培养基注入组组织培养容器内,注入量为瓶容积的十分之一左右。灌装要迅速,尽可能避免培养基粘在瓶壁上,且应在培养基未冷却之前灌装完毕。


  6、用封口膜或含透气膜的塑料盖将瓶口或试管口封严。

  7、将封装好的组织培养容器码放在高压灭菌锅内。于105Pa压力、121℃下灭菌20分钟。如使用小型手提式灭菌锅时,一定要注意,当锅内压力上升时,先反复放气数次,将锅内空气排尽以后,再计算时间,否则达不到高压灭菌的效果。

  8、对于一些受热易于分解的物质,如维生素类,可采取先过滤灭菌的方法。待培养基灭菌后,尚未冷却之前(40℃左右)加入并摇匀。经过高压灭菌的培养基可在室温下存放3-5天,或在冷藏箱内存放10天左右,最好在短时间内用完。







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